换一批
换一批RBPJ与KyoT2真核表达载体的构建与鉴定
Construction and identification of eukaroyotic expression vector of RBPJ and KyoT2
摘要目的:构建含有myc-RBPJ(R218H)(recombination binding protein-J)、myc-KyoT2融合基因片段的质粒,并在真核细胞中表达、鉴定.方法:由本科室保存质粒酶切分别得到RBPJ(R218H)和myc-KyoT2基因片段,将RBPJ(R218H)基因插入载体PCMV-myc中,获得融合基因myc-RBP-J(R218H),将myc-RBPJ(R218H)和myc-KyoT2插入真核表达载体pIRES2-EGFP,构建真核表达载体myc-RBPJ(R218H)-IRES2-EGFP、myc-KyoT2-IRES2-EGFP.以其瞬时转染HEK293细胞,应用免疫印迹与流式细胞术检测融合蛋白与绿色荧光蛋白的表达.结果:正确获得myc-RBPJ(R218H)融合基因,DNA序列分析表明所构建的含myc-RBPJ(R218H)、myc-KyoT2融合基因的质粒与设计相同,myc-RBPJ(R218H)、myc-KyoT2融合蛋白与绿色荧光蛋白均正确表达.结论:成功构建了含有myc-RBPJ(R218H)、myc-KyoT2融合基因的真核表达载体,并在真核细胞中正确表达,为进一步研究慢性粒细胞白血病与Notch信号转导通路之间的关系奠定了基础.
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主题词
蛋白(Egg White)荧光(Fluorescence)基因(Genes)白血病, 髓系, 慢性, BCR-ABL阳性(Leukemia, Myelogenous, Chronic, BCR-ABL Positive)质粒(Plasmids)
分类号
R730
栏目名称
基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1672-4992.2007.12.002
发布时间
2008-03-10
基金项目
国家自然科学基金
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