换一批
换一批抗氧化反应元件调控的EGFP在HepG2细胞中的表达
The expression of enhanced green fluorescent protein regulated by anti-oxidative response element in HepG2 cell
摘要目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系.方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并转染入HepG2细胞株,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养.结果:重组载体经酶切和PCR鉴定,发现有TK和ARE-TK基因特异条带.DNA测序发现ARE-TK-EGFP框架正确.转染细胞在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光颗粒,该细胞经不同浓度已知Ⅱ相酶诱导剂tBHQ作用后,与EGFP表达量有剂量效应关系.结论:ARE调控的EGFP在HepG2细胞中成功表达.为进一步高通量筛选Ⅱ相酶诱导剂奠定了基础.
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分类号
R730
栏目名称
基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1672-4992.2013.05.18
发布时间
2013-07-05
基金项目
教育部博士点基金项目
江苏省高校自然科学基金项目
扬州大学科技创新培育基金项目
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