EEN-B1及其启动子甲基化在外阴鳞状细胞癌中的表达及意义

Methylation of promoter in EEN-B1 gene and its impact on expression in vulvar squamous cell carcinomas

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摘要目的:检测EEN-B1在外阴鳞癌组织及外阴鳞癌细胞株中的启动子甲基化及蛋白表达情况,探讨其启动子异常甲基化在外阴鳞癌发病过程中的作用.方法:采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic se-quencing PCR,BSP)联合TA克隆测序法,以正常外阴组织作对照,检测外阴鳞癌组织中EEN-B1启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)作用于外阴鳞癌细胞A-431,检测作用前后甲基化率变化情况;Western blot方法检测外阴鳞癌及对照组织中EEN-B1蛋白表达情况,检测5-aza-dC处理前后A-431中该蛋白表达情况.结果:在癌组织中EEN-B1启动子的甲基化率为54.66％,与对照组织的12.16％相比,差异具有统计学意义;而在外阴鳞癌组织中EEN-B1蛋白明显下调;经1×10-7mol/L5-aza-dC处理72小时后,A-431细胞系中EEN-B1启动子的甲基化率由67.05％下降至26.82％(P ＜0.05),而该蛋白表达明显上调.结论:外阴鳞癌细胞株A-431及癌组织中EEN-B1基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化可能导致了外阴鳞癌组织及细胞系中EEN-B1基因的表达沉默.