Phe112、Trp86和Tyr108对CCR5与趋化因子CCL5结合及趋化作用的影响

Influence of Phe112,Trp86 and Tyr108 on binding and chemotaxis effects of CCR5 to chemokine CCL5

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摘要目的:揭示人趋化因子受体5(human C-C chemokine receptor 5,hCCR5)中与人趋化因子配体5(hu-man C-C motif chemokine ligand 5,hCCL5)结合并影响hCCL5趋化作用的关键氨基酸.方法:根据生物信息学分析提示的信息,采用定点突变技术,对CCR5受体中Phe112、Trp86和Tyr108分别构建了CCR5-F112A、CCR5-W86A和CCR5-Y108A突变体质粒,并通过慢病毒感染技术感染人胚胎肾细胞HEK293T,分别获得了CCR5-F112A、CCR5-W86A和CCR5-Y108A突变体细胞株.通过激光共聚焦显微镜技术,进一步检测了这些突变对CCR5受体与趋化因子CCL5结合的影响.此外,通过CCK8细胞增殖和Transwell侵袭实验,检测了这些突变对趋化因子CCL5对CCR5受体所带来的肿瘤细胞增殖和侵袭的影响.结果:实验结果显示,CCR5中的Phe112或Trp86位点发生突变后,CCR5受体与CCL5的结合能力以及CCL5的趋化作用均显著减弱,但Tyr108并不显著.结论:CCR5受体中Phe112和Trp86是影响CCR5与CCL5结合的关键氨基酸.此外,这些构建的突变体,也可为进一步揭示CCL5/CCR5生物轴对其在肿瘤疾病中重要生物学功能的研究提供实验研究工具.