miR-335-5p靶向调控Galectin-3调节前列腺癌细胞免疫逃逸的机制研究
Study on the mechanism of miR-335-5p regulating the immune escape of prostate cancer cells through targeted regulation on Galectin-3
摘要目的:探讨miR-335-5p靶向调控半乳糖凝集素-3(Galectin-3)对前列腺癌细胞免疫逃逸的影响.方法:qRT-PCR检测正常前列腺上皮细胞 WPMY-1 及前列腺癌细胞 LNCaP、PC-3、DU145 中miR-335-5p的表达;将PC-3 细胞分为:NC组、mimics NC组、miR-335-5p mimics组、miR-335-5p mimics+pcDNA组、miR-335-5p mimics+pcDNA-Galectin-3 组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-335-5p表达;western blot检测各组细胞中Galectin-3 蛋白表达.将上述5 组细胞分别与自然杀伤细胞NK-92MI共培养后,ELISA法检测共培养细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)水平;CCK-8 法检测NK-92MI细胞的免疫杀伤率;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因、RNA下拉、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证miR-335-5p与Galectin-3 的靶向关系.结果:与正常前列腺上皮细胞WPMY-1 比较,前列腺癌细胞LNCaP、PC-3、DU145 中miR-335-5p的表达水平显著降低(P<0.05),且PC-3 细胞中miR-335-5p的表达水平最低,因此选用PC-3 细胞为后续研究对象;与NC组比较,miR-335-5p mimics组PC-3 细胞中miR-335-5p表达水平显著升高,Galectin-3 蛋白表达显著降低(P<0.05);与NC共培养组比较,miR-335-5p mimics共培养组细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及NK-92MI细胞免疫杀伤率显著升高,NK-92MI细胞凋亡率降低(P<0.05);与miR-335-5p mimics组比较,miR-335-5p mimics+pcDNA-Galectin-3 组PC-3 细胞中miR-335-5p表达水平差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3 蛋白表达显著升高(P<0.05);与miR-335-5p mim-ics共培养组比较,miR-335-5p mimics+pcDNA-Galectin-3 共培养组细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及NK-92MI细胞免疫杀伤率显著降低,NK-92MI细胞凋亡率升高(P<0.05);miR-335-5p靶向负调控Galectin-3 表达.结论:过表达miR-335-5p通过靶向下调Galectin-3 表达来抑制PC-3 细胞免疫逃逸.
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