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葫芦巴碱调节CD47/SIRPα信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

Impacts of trigonelline on the proliferation,apoptosis and immune escape of gastric canc-er cells by regulating CD47/SIRPα signaling pathway

摘要目的:研究葫芦巴碱调节分化簇47(CD47)/信号调节蛋白α(SIRPα)信号通路对胃癌MGC803细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响.方法:以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测0、20、40、80、160、320 μmol/L的葫芦巴碱处理后的人胃癌细胞株MGC803存活率,筛选其最佳作用浓度.将体外培养的MGC803细胞随机分为对照组、葫芦巴碱组(160 μmol/L的葫芦巴碱处理)、CD47敲低组[转染CD47小干扰RNA(siRNA)质粒]、空载组(转染CD47空载质粒)、葫芦巴碱+CD47过表达组(160 μmol/L的葫芦巴碱干预处理+转染CD47过表达质粒),培养24 h后.采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CD47/SIRPα通路表达;EdU染色和MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;免疫荧光染色检测各组细胞凋亡[B淋巴细胞瘤-2(Bel-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]相关蛋白表达;以不同细胞比例共培养人外周血单个核细胞与各组MGC803细胞后以MTT法检测人外周血单个核细胞对各组MGC803细胞的杀伤率;裸鼠体内移植瘤实验验证葫芦巴碱对CD47/SIRPα通路的调控作用.结果:20、40、80、160、320 μmol/L的葫芦巴碱均可降低MGC803细胞存活率(P<0.05),且其降低作用随着葫芦巴碱浓度升高而增强,选择接近半抑制浓度值(168.94 μmol/L)的160μmol/L葫芦巴碱进行后续实验.与对照组比较,葫芦巴碱组、CD47敲低组细胞和移植瘤组织CD47、SIRPα mRNA及蛋白表达、EdU阳性率、存活率、Bcl-2相对荧光强度、移植瘤重量、移植瘤体积降低,凋亡率、Bax相对荧光强度、人外周血单个核细胞对MGC803细胞杀伤率升高(P<0.05).与葫芦巴碱组比较,葫芦巴碱+CD47过表达组细胞和移植瘤组织CD47、SIRPα mRNA及蛋白表达、EdU阳性率、存活率、Bcl-2相对荧光强度、移植瘤重量、移植瘤体积升高,凋亡率、Bax相对荧光强度、人外周血单个核细胞对MGC803细胞杀伤率降低(P<0.05).结论:葫芦巴碱可通过抑制CD47/SIRPα通路表达来抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡,还可减轻其免疫逃逸.

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现代肿瘤医学

现代肿瘤医学

2024年32卷13期

2346-2353页

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