NEDD4L增强IGF2BP2的泛素化对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

Effects of NEDD4L enhancing IGF2BP2 ubiquitination on proliferation,apoptosis,migra-tion and invasion of colorectal cancer cells SW620

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摘要目的:探讨NEDD4L对人转移性结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制.方法:生物信息学分析筛选IGF2BP2/NEDD4L泛素化作用轴并构建NEDD4L过表达的SW620细胞株,实时荧光定量(RT-qPCR)检测NEDD4L mRNA表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,CHX和MG132处理SW620细胞,Western blot检测IGF2BP2蛋白的表达.同时构建Flag-IGF2BP2、His-NEDD4L、HA-Ub重组质粒并在293T细胞中采用免疫共沉淀检测NEDD4L对IGF2BP2的泛素化水平的影响.结果:SW620细胞中成功实现NEDD4L过表达,并且导致细胞增殖能力显著降低(P＜0.05),凋亡能力显著上升(P＜0.01);同时抑制细胞周期进程(P＜0.05).细胞迁移率显著降低(P＜0.01),细胞侵袭数量显著降低(P＜0.01);Western blot结果显示,过表达NEDD4L能够显著降低IGF2BP2、YAP、VEGFA的蛋白表达水平,Co-IP结果显示NEDD4L增强IGF2BP2与Ub的结合能力.结论:NEDD4L在结直肠癌细胞中通过增强IGF2BP2的泛素化,进而降低YAP、VEGFA的蛋白表达来实现抑癌功能.