转移性胃癌干细胞单抗6H6靶向治疗胃癌的实验研究

Experimental study on targeted therapy of gastric cancer with metastatic gastric cancer stem cell monoclonal antibody 6H6

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摘要目的:研究一株识别转移性胃癌干细胞的单克隆抗体6H6的体外功能实验,为靶向治疗胃癌提供候选抗体药物.方法:流式细胞术分选胃癌细胞系SNU-16中CD44(+)细胞,双色细胞免疫荧光染色检测CD44与6H6单抗识别的抗原蛋白在SNU-16细胞中的表达.无血清悬浮培养检测流式分选SNU-16中CD44(+)细胞的自我更新能力及6H6单抗对CD44(+)细胞自我更新能力的影响.Transwell小室法检测SNU-16中CD44(+)细胞的侵袭能力及6H6单抗对CD44(+)细胞侵袭能力的影响,CCK8法检测单抗6H6对SNU-16中CD44(+)细胞顺铂耐药性的影响.裸鼠体内治疗实验分析6H6单抗联合顺铂对SNU-16移植瘤生长的抑制作用.结果:免疫荧光显示单抗6H6识别的抗原能与CD44在SNU-16细胞上共定位.与CD44(-)细胞相比较,成球实验和Transwell实验证明SNU-16中CD44(+)细胞具有更强的自我更新和侵袭能力.抗体的体外功能研究发现,单抗6H6能显著抑制SNU-16中CD44(+)细胞的成球率和侵袭率,抑制率分别达35.8％(P＜0.01)和31.6％(P＜0.01).单抗6H6能够有效降低SNU-16中CD44(+)细胞顺铂耐药性,实验组与对照组的IC50分别为0.76 μg/mL和1.98 μg/mL.此外,体内治疗实验发现单抗6H6可明显抑制SNU-16移植瘤的生长,当高浓度(40 mg/kg)时,其抑制作用高达81.9％,抗体抑制作用存在剂量依赖关系.结论:单抗6H6体外能够显著抑制转移性胃癌干细胞的干性特征,为胃癌靶向治疗提供有价值的候选靶向药物.