摘要目的:通过体外实验探索荜茇酰胺(piperlongumine,PL)对胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的增殖抑制作用及GBM细胞死亡的主要方式、分子机制.方法:用CCK-8试剂盒检测PL对胶质瘤LN229和A172细胞活力的影响;平板克隆实验检测PL对胶质瘤细胞增殖的抑制作用;电子显微镜观察线粒体结构变化;免疫荧光Ki67染色实验检测细胞增殖能力;免疫荧光实验检测4-HNE水平;用相应化验试剂盒检测GSH、MDA水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;CCK-8实验检测各种细胞死亡抑制剂对PL抑制胶质瘤细胞增殖的回复效果;流式细胞术凋亡试剂盒检测Fer-1的回复效果;生信分析寻找靶基因及分子对接评价;WB检测铁死亡相关蛋白;RT-qPCR检测mRNA水平;质粒转染过表达EZH2基因;CHIP实验及qPCR检测H3K27me3蛋白与Keap1 DNA之间的相互作用.结果:PL能抑制胶质瘤细胞LN229和A172的细胞活力;抑制胶质瘤细胞增殖;超微结构显示细胞内线粒体变小,双层膜密度增高;细胞内GSH水平下降,ROS、MDA、4-HNE水平增高;铁死亡抑制剂Fer-1及Lip-1能够回复PL对胶质瘤细胞增殖的抑制作用;荜茇酰胺小分子配体与靶蛋白大分子EZH2结合稳定;铁死亡相关蛋白PTGS2水平增高,Nrf2、xCT、GPX4水平降低.PL靶蛋白EZH2降低,其下游蛋白H3K27me3降低,Nrf2的上游蛋白Keap1增加;EZH2和Nrf2的mRNA水平无明显变化,而Keap1的mRNA水平增加;过表达EZH2后,H3K27me3、Keap1和Nrf2水平呈现相应的变化;CHIP实验表明H3K27me3蛋白与Keap1 DNA存在相互作用.结论:荜茇酰胺通过一个新的EZH2/H3K27me3/Keap1/Nrf2通路诱导胶质瘤细胞铁死亡,有望为GBM的治疗提供一个有潜力的药物.