不同化疗药物对乳腺癌细胞MGMT表达水平的影响及其药物敏感性分析

Analysis of the Effects of Different Chemotherapeutic Agents on the Expression Level of MGMT in Breast Cancer Cells and Their Drug Sensitivity

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摘要目的探讨不同化疗药物对O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methyl-guanine DNA methyltransferase,MGMT)表达水平的影响及其药物敏感性.方法采用Western Blotting检测环磷酰胺作用后MCF-7 和MDA-MB-231 细胞中MGMT蛋白水平变化;采用免疫荧光检测MGMT表达水平及其在乳腺癌细胞中内的定位情况;构建含MGMT启动子片段的荧光素酶报告载体转染入乳腺癌细胞MCF-7 和MDA-MB-231,应用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测经不同化疗药物(环磷酰胺、紫杉醇、吉西他滨)作用24h后MGMT的转录活性;通过RT-qPCR检测化疗药物作用后MCF-7 和MDA-MB-231 细胞内MGMT mRNA水平变化;采用CCK8 实验检测MCF-7 和MDA-MB-231 细胞对上述化疗药物的敏感性.结果环磷酰胺作用后两种细胞的MGMT蛋白水平均下降;荧光素酶报告的实验结果显示与对照组相比,经环磷酰胺处理后检测到MDA-MB-231 细胞的发光强度增强,MCF-7 细胞的发光强度减弱,具有统计学差异;RT-qPCR结果显示环磷酰胺作用后,MDA-MB-231 细胞的MGMT mRNA水平升高,而MCF-7 细胞的MGMT mRNA水平下降;CCK8 实验结果显示在化疗药物作用下,MDA-MB-231 细胞比MCF-7 细胞的IC50 值高.结论在三阴性乳腺癌MDA-MB-231 细胞中环磷酰胺造成肿瘤细胞耐药与促进MGMT的转录上调密切相关.