小鼠微小病毒(MVM)荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
Establishment and Preliminary Application of the Real-time PCR for Detecting Minute Virus of Mice (MVM)
摘要目的 建立小鼠微小病毒(MVM)荧光定量PCR方法,并初步应用于实验小鼠中.方法 根据NCBI上发表的MVM(NC_001510)基因组序列,设计引物和探针,建立MVM荧光定量PCR方法.考察引物探针的最佳线形范围,特异性及灵敏度,并使用该方法对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测.结果 MVM荧光定量PCR方法最佳线性范围为109 ~ 104拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μL,特异性强,与大鼠细小病毒H-1株和KRV株、猪细小病毒均无交叉反应.应用荧光定量PCR方法对178份小鼠粪便DNA进行检测,结果均为阴性.结论 建立的MVM荧光定量PCR方法具有特异、灵敏的特点,为MVM的流行病学调查、检测提供了有效的技术支持.
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