换一批
换一批兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌多重PCR检测方法的建立
Establishment of a Multiplex PCR Assay for Simultaneous Detection Pasteurella Multocida、Staphyloccocus Aureus and Klebsiella Pneumoniae from Rabbit
摘要目的 建立兔源多杀性巴氏杆菌(Pm)、金黄色葡萄球菌(Sa)和肺炎克雷伯菌(Kp)的多重 PCR 方法.方法 本研究参考Pm kmt1 基因、Sa nuc基因和Kp kh1 基因的保守区域,设计 3 对特异性引物,以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm),采用控制单一变量法优化引物浓度,构建 kmt1、nuc 和 kh1 基因的重组质粒标准品 pMD-Pm、pMD-Sa和pMD-Kp,确定最小检测量;以兔源支气管败血波氏杆菌和产气荚膜梭菌等 9 种病原体核酸样本确定多重 PCR法的特异性;通过批间和批内实验验证其重复性;经检测疑似感染的临床样本与已报道的检测方法进行比较,评估其临床应用效果.结果 最适退火温度为 54.5℃;扩增 kmt1 和 nuc 基因的引物最适浓度均为 1 μL(10 μmol/L),扩增 kh1 基因的引物最适浓度为 0.5 μL(10 μmol/L);pMD-Pm 最低检测限为 20.6 copies/μL,pMD-Sa最低检测限为 18.2 copies/μL,pMD-Kp最低检测限为 23.2 copies/μL,表明其灵敏性高;该方法仅对 Pm、Sa 和Kp有特异性扩增条带,对其他病原体均无扩增条带,表明特异性较强;批间和批内检测结果一致,表明重复性较好;经临床样本检测 Pm、Sa和 Kp单独的阳性率分别为 62.92%、25.84%和 49.43%,与已报道的检测方法结果一致.结论 本研究成功建立了一种能够同时快速检测兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的多重 PCR方法.
更多相关知识
关键词
多杀性巴氏杆菌金黄色葡萄球菌肺炎克雷伯菌多重PCRPasteurella multocidaStaphylococcus aureusKlebsiella pneumoniaeduplex PCR
分类号
Q95-3
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1006-6179.2023.04.003
发布时间
2023-08-25
基金项目
国家重点研发计划
高等级农业实验动物猪培育、质量控制及检测技术
实验动物资源培育及检测质量提升研究
实验猪质量控制及其抗病性遗传基础研究
实验猪质量控制及其抗病性遗传基础研究
- 浏览28
- 被引0
- 下载2
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
