建立检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2的mRNA相对表达水平的RT-qPCR方法

Establishing a Real-time qPCR Method for Detecting the mRNA Level of ABCG2 in Macaque

二维码有效期 120s

摘要目的本研究旨在建立一种实时荧光定量 PCR 方法,用于检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白 G2(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2,ABCG2)mRNA的基因转录水平.方法使用NCBI上GenBank数据库猕猴(Macaca mulatta)的 ABCG2 核苷酸序列号 NM_001032919.1 及内参 GAPDH 核苷酸序列号NM_001195426.1,借助 Primer premier 5.0 软件设计 PCR 引物.提取猕猴新鲜肾组织的总 RNA,并反转录合成cDNA.接着,利用 PCR引物进行实时荧光定量 PCR扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析 ABCG2 的mRNA相对表达水平.结果 PCR 产物测序结果显示,扩增的 ABCG2 和 GAPDH 核苷酸序列与 NCBI 上猕猴的序列同源性分别为 90.91%和 91.14%.ABCG2 和 GAPDH的扩增效率均达到 80%～120%,实时荧光定量 PCR标准曲线的熔解曲线为单峰,R2 接近 1.结论本研究建立的检测猕猴 ABCG2 mRNA 实时荧光定量检测方法,为研究高尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础.