换一批裂谷热病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法的建立
Establishment of RT-RAA-CRISPR/Cas12a Nucleic Acid Visualization Detection Method for Rift Valley Fever Virus
摘要目的 针对裂谷热病毒(RVFV),建立快速可视化检测方法,为 RVFV早期诊断、实验动物健康监测及疫情防控提供技术支持.方法 分析 RVFV S基因保守序列,设计并筛选特异性反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)引物与 CRISPR/Cas12a系统的 gRNA,建立 RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法;优化 CRISPR/Cas12a反应体系,每个浓度设置 3 个平行,随后优化 RT-RAA 反应条件,以提高方法的检测性能;随后评价该方法的敏感性及特异性.所有实验结果均经 3 次重复实验验证.结果 针对 RVFV S 基因,建立了 RT-RAA-CRISPR/Cas12a 核酸可视化检测方法;通过条件优化实验确定,当 Cas12a 蛋白工作浓度为 0.053 μmol/L、gRNA 工作浓度为0.075 μmol/L,在 39℃条件下完成 30 min等温扩增、随后于 37℃进行 20 min 检测反应时,该方法的检测性能最佳;敏感性实验结果显示,该方法可稳定检出浓度低至 0.5 copies/μL的RVFV S基因重组质粒,具有高敏感性;特异性实验表明,该方法与尼帕病毒RNA、拉沙病毒重组质粒(N 基因)、埃博拉病毒 RNA、新布尼亚病毒 RNA 无交叉反应,具有强特异性.结论 本研究成功建立了RVFV RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法,该方法具有敏感性高、操作简单等优势,有望应用于基层实验室,为RVFV早期检测提供技术支持,助力疫苗研发及疫情防控.
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关键词
裂谷热病毒反转录重组酶介导等温扩增CRISPR/Cas12a核酸可视化检测RVFVRT-RAACRISPR/Cas12anucleic acid visual detection method
分类号
Q95-3（动物学的研究与实验）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-6179.2025.05.005
发布时间
2025-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2021YFF0703600）
吉林省科技发展计划重点研发项目（20250202061NC）
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