GTF2 E2通过调控PolⅡ和TFⅡH的活性对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的影响
Effects of GTF2E2 on the Proliferation and Invasion of Endometrial Carcinoma Cells by Regulating of PolⅡ and TFⅡH Activity
摘要目的:探讨转录因子ⅡE亚基β(GTF2E2)在子宫内膜癌(EC)中的表达特征及其功能机制.方法:从癌症基因组图谱(TCGA)-子宫体子宫内膜癌(UCEC)队列获取临床资料及转录组数据,经标准化处理后用于分析.通过慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)下调GTF2E2 在EC细胞系中的表达,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、划痕愈合、Transwell 侵袭及流式细胞术检测两组[GTF2E2 干扰组(shGTF2E2 组)和空载体转染组(shCtrl组)]细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期变化;在裸鼠皮下异种移植模型中评估其对肿瘤生长的影响.利用蛋白免疫印迹(Western blot)检测转录起始复合物关键蛋白——RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)的C 末端结构域(CTD)激酶、转录因子ⅡH(TFⅡH)复合物的DNA依赖性ATP酶(TFⅡH-DNA-ATP酶)及下游效应分子核糖体蛋白S4X-连锁(RPS4X)的蛋白表达水平.结果:①TCGA分析显示,与癌旁组织相比,GTF2E2 在EC组织中显著高表达(P<0.001),但其不同表达水平的生存差异无统计学意义(P>0.05).②体外实验表明,沉默GTF2E2 可显著抑制EC细胞增殖、迁移和侵袭,并导致G1 期细胞比例增加,凋亡率增加,差异均有统计学意义(P<0.01).沉默GTF2E2 可下调CTD激酶、TFⅡH-DNA-ATP酶及RPS4X蛋白表达(P<0.001).③动物实验显示,GTF2E2 敲低后 shGTF2E2 组肿瘤体积及重量显著低于 shCtrl 组(P<0.01).结论:GTF2E2 在EC中呈高表达状态并促进肿瘤细胞的增殖与侵袭,其作用可能通过调控转录起始复合物关键蛋白(CTD 激酶、TFⅡH-DNA-ATP 酶)及下游效应分子 RPS4X 实现.GTF2E2 有望成为EC早期诊断及靶向治疗的新分子靶点.
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