换一批慢病毒载体介导的结缔组织生长因子基因沉默对下游基因的影响
RNA interference mediated by lent viral vector suppresses the expression of connective tissue growth factor and its effect on downstream gene
摘要目的 利用RNA干扰技术,以慢病毒为载体,介导结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默,并观察其对下游基因表达的影响.方法 用构建的CTGF小干扰RNA(siRNA)慢病毒转移质粒与包装质粒、包膜蛋白质粒共转染293T细胞,包装成介导CTGF基因沉默的慢病毒载体;感染肝星状细胞系HSC-T6,应用Real-time PCR和Western免疫印迹法筛选基因沉默效率最高的慢病毒载体;再根据绿色荧光蛋白(GFP)表达水平检测感染效率;应用Real-time PCR法检测CTGF基因沉默后HSC-T6中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2和Ⅰ型胶原mRNA表达水平.结果 包装的慢病毒载体感染HSC-T6细胞的效率高于50%;感染HSC-T6细胞后,CTGF的表达在mRNA和蛋白水平均受到明显抑制,其中TS1具有最佳的抑制效率;HSC-T6细胞CTGF基因沉默后,其TIMP-1、TIMP-2和Ⅰ型胶原mRNA水平也显著降低.结论 包装的慢病毒载体在HSC-T6中具有较好的感染效率和CTGF基因沉默效果,基因沉默后可进一步抑制HSC-T6细胞TIMP-1、TIMP-2和Ⅰ型胶原的基因表达,这在抗纤维化的研究中具有积极的意义.
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分类号
R575.2（消化系及腹部疾病）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-5069.2012.03.013
发布时间
2012-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30571658）
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