摘要目的 探讨慢性损伤模型细胞周期抑制因子P21(P21)表达对肝损伤程度和胆管上皮细胞转分化为肝细胞的影响.方法 利用谱系示踪技术建立胆管上皮细胞示踪模型小鼠;在胆管上皮细胞示踪小鼠,利用腺相关病毒构建肝细胞特异性P21 过表达模型;利用胆碱缺乏/乙硫氨酸补充饮食(CDE)构建小鼠严重慢性肝损伤模型;采用蛋白印迹和免疫组织荧光法检测胆管上皮细胞标记和P21 过表达水平,以过表达P21 为实验组,过表达空载体为对照组,取损伤2w和损伤后恢复2w的小鼠肝组织,采用蛋白印迹、免疫组织化学和免疫组织荧光等技术检测肝损伤程度、细胞增殖水平、胆管上皮细胞转分化效果和转分化细胞特性.结果 在CDE诱导慢性肝损伤小鼠,肝细胞特异性过表达P21 组肝脏外观表面失去原有光泽,肝质量比为(4.5±0.1)%,显著低于对照组[(5.2±0.2)%,P<0.05];血清AST、ALT和TBIL水平分别为(385.4±12.7)U/L、(423.8±32.4)U/L和(21.3±1.4)μmol/L,显著高于对照组[分别为(175.9±11.4)U/L、(214.8±23.5)U/L和(10.5±0.9)μmol/L,P<0.05];过表达P21 组肝细胞Ki67 阳性比例为(0.1±0.1)%,显著低于对照组[(8.2±1.5)%,P<0.05],S期标志蛋白CyclinA2 阳性比例为(0.1±0.2)%,显著低于对照组[(3.2±0.7)%,P<0.05],而两组间G1 期特异性蛋白CyclinD1 阳性比例无显著性差异[(43.2±3.5)%对(42.0±2.8)%,P>0.05]],提示肝细胞过表达细胞周期抑制蛋白P21 使肝细胞阻滞于G1/S期;肝细胞过表达细胞周期抑制蛋白P21 组在损伤恢复 2 周时出现了带有绿色荧光标记的肝细胞样克隆,这群细胞表达HNF4α肝细胞标志物.进一步分析发现绿色肝细胞样克隆具有成熟肝细胞的特征,比如表达Alb、CYP3A4、CYP2E1 和CYP2D6 等.结论 在肝损伤过程中,P21 过表达抑制肝细胞增殖能力,导致肝损伤程度加剧,从而促进胆管上皮细胞转分化为具有功能的成熟肝细胞.