换一批
换一批摘要目的:构建人牙本质涎蛋白(human dentin sialoprotem,hDSP)真核表达载体,用瞬时系统表达目的基因.方法:将hDSP全长基因定向克隆人真核表达质粒载体pcDNA3,构建pcDNA3-hDSP重组质粒,脂质体转染法转染COS-7细胞,48～72 h收集细胞及培养上清,Western blot和免疫组化检测表达产物.结果:酶切鉴定表明重组表达载体构建成功;Western blot检测显示在60 000处出现一条清晰的特异性免疫阳性条带;免疫组化染色显示细胞胞质内有大量棕黄色颗粒,进一步证明该转染方法可行,转染效率较高.结论:hDSP全长基因可以在COS-7细胞获得瞬时高效表达.
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