人脱落乳牙牙髓干细胞条件培养基对大鼠颞下颌关节骨关节炎髁突软骨退变转归影响的初步研究
A preliminary study on the prognosis of condylar cartilage degeneration of rat temporomandibular osteo-arthritis treated with conditioned media of stem cells from human exfoliated deciduous teeth
摘要目的:评估将人乳牙牙髓干细胞(SHED)条件培养基(CM)注射入关节腔,对大鼠颞下颌关节骨关节炎(TMJ OA)髁突软骨退变过程的干预作用.方法:选取60只8周龄雄性SD大鼠,随机分为3组:对照组(CON)、碘乙酸钠(MIA)诱导的TMJ OA模型组,以及建模1周后接受SHED条件培养基注射治疗的组(SHED-CM),每组均含20只.在治疗后2周和4周取材并进行组织学切片,HE、番红O-固绿染色、Col Ⅱ免疫组化染色以及TUNEL染色.对4周取材的髁突软骨进行Western blotting、RT-qPCR 等检测凋亡相关分子(cleaved-CASP3、BAX、BCL2)、炎症因子(IL-1β、IL-6、TNFα、MMP3、ADAMTS5)及MAPK通路相关蛋白(p-ERK、ERK、p-P38、P38)的表达情况.结果:与对照组(CON)及SHED-CM组相比,MIA组髁突软骨细胞的排列出现明显紊乱,层次结构遭到破坏,纤维层厚度显著增加(P<0.001),Mankin's OA组织学评分显著升高(P<0.001).在番红O染色和Col Ⅱ免疫组化检测中,MIA组阳性区域比例均显著低于另外两组(P<0.001),而TUNEL阳性细胞率则显著高于另外两组(均P<0.001).Western blot结果显示,MIA组髁突软骨中凋亡关键分子cleaved-CASP3、BAX/BCL2以及MAPK通路相关分子p-ERK、ERK、p-P38和P38的蛋白表达水平显著高于CON组和SHED 组(BAX/BCL2:P<0.05,cleaved-CASP3:P<0.01,p-P38/P38:P<0.001,p-ERK/ERK:P<0.01).qRT-PCR 结果显示,相较于 Con 组和 SHED-CM 组,MIA 组促炎相关因子 IL-1β(P<0.001)、IL-6(P<0.01)、TNFα(P<0.01)、MMP3(P<0.001)、ADAMTS5(P<0.05)的mRNA表达显著升高.结论:研究结果提示,SHED-CM经关节腔注射能够在大鼠TMJ OA模型中显著减轻由MIA诱导的髁突软骨退变,呈现出良好的保护和修复作用.
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