shRNA诱导Maspin基因启动子甲基化调控口腔鳞状细胞癌迁移与侵袭能力的实验研究

Experiment research in the regulation of Maspin gene promoter methylation targeted by short hairpin RNAs on HN13 cells migration and invasion ability

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摘要目的观察shRNA诱导Maspin基因启动子甲基化对口腔鳞状细胞癌HN13细胞株体外侵袭和迁移能力的影响.方法针对Maspin基因的启动子区域甲基化位点设计特异性shRNA序列sequence 1、2、3、4及非特异性序列sequence 0,构建重组腺病毒,以空载病毒为对照组,转染至HN13细胞株,观察转染率、细胞生长曲线及甲基化程度.同时,采用实时RT-PCR和WB实验检测各组Maspin的mRNA与蛋白表达水平;采用Transwell小室实验检测各组HN13细胞的迁移和侵袭数目.结果 Maspin-shRNA重组腺病毒转染率达到95％以上,转染后sequence 1、2、4细胞生长速率有所升高,与对照组相比差异明显,且sequence 1、2、4的甲基化程度也明显高于对照组(P＜0.05).转染后培养7d,与对照组相比,sequence 0细胞Maspin的mRNA与蛋白表达水平有所升高,sequence 1、2、4有所降低,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,sequence 0细胞迁移和侵袭数目有所降低,sequence 1、2、4有所升高,其组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Maspin基因启动子甲基化可促进体外口腔鳞状细胞癌HN13细胞的侵袭和迁移.