多重实时定量PCR技术在口罩致病菌快速检测中的应用研究

Application of multiplex real-time quantitative PCR technology in rapid detection of pathogenic bacteria on face masks

二维码有效期 120s

摘要目的本研究旨在开发一种基于多重实时定量PCR技术的快速检测方法,用于准确识别并量化口罩中常见致病菌,以评估口罩的卫生状况并控制院内感染.方法采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR为核心技术,设计并优化特异性引物和荧光标记探针,通过一管式多重检测来同时定量三种病原菌的特异性基因序列.实验首先从NCBI 数据库中筛选特异性靶基因和序列,并设计引物和探针.随后对引物和探针进行质量检测,并通过扩增特异性序列和TA克隆方法制备标准品.最终建立起标准曲线,并对口罩样本进行了检测.结果通过优化实验条件后,成功地建立了一个高效、稳定的多重实时定量PCR检测体系,并在不同浓度梯度下评估了三种病原菌标准品的检测效率.检测数据显示,引物和探针对于目标病原菌具有高度特异性,且扩增效率和信号强度均满足实验要求.在对口罩样本进行检测中,能够准确定量出其中的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的基因组DNA拷贝数,并据此评估口罩上的微生物污染程度.结论基于多重实时定量PCR技术的口罩中致病菌快速检测方法具有高敏感性、特异性和快速性,能够为临床和公共卫生监控提供有力的技术支撑.这种方法可以应用于医院环境的卫生监测以及对日常使用口罩的卫生状况进行评估,有助于防止传染病的传播,提升公共卫生安全.