换一批摘要目的 探讨中间段向 5'端延长的方法在cDNA末端快速扩增技术(RACE)中的应用.方法 通过多序列比对找到目的基因保守区,利用保守区设计兼并引物,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出中间段;根据得到的中间序列设计巢式引物,利用3'RACE得到3'端;利用保守区设计兼并引物通过中间段向5'端延伸技术缩短中间段至 5'端的距离;根据 5'端延伸得到的核酸序列设计巢式引物,利用 5'RACE延伸得到 5'端.结果 利用目的基因保守区设计兼并引物,通过RT-PCR扩增出长度为 345 bp的中间段核苷酸序列;根据得到的中间序列设计巢式引物,利用3'RACE技术得到长度为 1300 bp的核苷酸序列;利用保守区设计兼并引物,通过中间段向 5'端延伸,缩短中间段至 5'端的距离得到长度为 1067 bp核苷酸序列;根据 5'端延伸得到的核酸序列设计巢式引物,利用 5'RACE得到长度为1384 bp核苷酸序列.结论 通过RT-PCR技术顺利得到中间段,通过 3'RACE顺利延伸到 3'端,利用中间段延长和 5'RACE顺利延伸到 5'端.为利用RACE技术过程中遇到类似问题的研究者提供一种思路和方法.
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