小鼠胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的永生化研究

IMMORTALIZATION OF ENDOTHELIAL CELLS DIFFERENTIATED FROM MOUSE EMBRYONIC STEM CELLS

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摘要本文探讨了小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的血管内皮细胞永生化.在体外培养系统中,以维甲酸(RA)和转化生长因子-βl(TGF-β1诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)的拟胚体(EB)分化为"圆形细胞"和由这些"圆形细胞"组成的血管样结构.经光学和扫描电镜及免疫荧光等法分析检测,证明组成血管样结构的细胞具有专一性vWF荧光染色,表明是血管内皮样细胞.利用脂质体将人端粒酶催化亚基逆转录酶(hTERT)基因转染诱导分化中的"圆形细胞".应用Dot-blot,RT-PCR,Western blot及免疫组织化学等方法分析、观察和证明了诱导分化的组成血管样结构的园形细胞和被hTERT基因转染的"圆形"细胞的形态和生物学特性.结果表明,携带hTERT基因的从ES细胞分化来的圆形细胞在体外可大量增殖,持续传代,95%具有血管内皮细胞的一些特有标志和管道化生长特性.因此,通过人端粒酶基因的转染途径可解决由ES细胞诱导分化而来的内皮细胞扩增和永生化问题,为构建组织工程化血管及其它人工血管的内皮化提供种子细胞来源打下基础.