换一批
换一批解旋酶依赖性等温扩增快速检测O157:H7及其毒力基因的研究
Rapid detection of Escherichia coli O157∶H7 and its virulence genes by helicase-dependent isothermal DNA amplification
摘要目的 建立一种快速、特异的检测大肠杆菌O157∶H7及其毒力基因的解旋酶依赖性等温扩增法(HDA). 方法 以大肠杆菌O157∶H7的溶血素基因(hly)、粘附抹平因子(eae)和O抗原编码基因(rfb)为扩增对象,设计3对特异性HDA引物,通过优化条件后进行灵敏度和特异度试验,并与普通PCR法比较. 结果 HDA法从标准菌株和实验室分离株中均扩增出hlyA、eaeA和rfb基因片段,产物大小分别为100、93和109 bp,而其他非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性.通过对各梯度大肠杆菌O157∶H7菌悬液的检测表明HDA法可以检测的最低菌液浓度为3.0×101 cfu/ml,该法与普通PCR法灵敏度相当. 结论 本HDA法具有较高的灵敏度和特异度,可快速、高效地检出大肠杆菌O157∶ H7菌和其毒力基因,而且对试验仪器要求低,特别适合应急处置现场和基层检验机构作为临床大肠杆菌O157∶ H7感染的辅助诊断.
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关键词
解旋酶依赖性等温扩增大肠杆菌O157∶H7hlyA基因eaeA基因rfb基因Helicase-dependent isothermal DNA amplificationEscherichia coli O157∶H7hlyAeaeArfb
分类号
R378.2
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1006-3110.2014.03.010
发布时间
2014-04-21
基金项目
湖南省科学技术厅项目
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