基于生物信息学分析青光眼差异表达基因及潜在干预中药实验研究
Experimental study on differential expression genes of glaucoma and potential intervention of traditional Chinese medicine based on bio-informatics
摘要目的 通过生物信息学方法分析青光眼发病相关核心差异基因,筛选出对青光眼治疗有干预作用的中药,并进行体外细胞实验验证,为青光眼中药治疗提供新的研究思路和实验依据.方法 从 GEO数据库中获取包含青光眼全基因组表达的数据集GSE27276,用R语言对其进行差异基因分析,String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,Cytoscape软件筛选核心差异基因.利用Python语言,在TCMSP数据库内抓取核心差异表达基因对应的化合物及相关中药,进行体外细胞实验研究.用MTT及MTS检测细胞存活率,采用Western Blot检测Bcl-2、Bax、caspase-3 蛋白表达,化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS),双抗体夹心法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL-1β)水平.结果 从GSE27276 中共获得194 个差异表达基因,其中表达下调基因为130 个,表达上调基因为64 个,通过Cytoscape获得15 个上调和15 个下调核心差异表达基因.利用Python语言,在TCMSP数据库内共抓取了 6 048 个/频次的化合物,最终共获得了498 个中药,出现频次最多的中药为冬瓜皮(2 852 频次),对其进行的体外实验结果表明,采用MTT及MTS两种检测细胞活力方法,高、中、低 3 种浓度冬瓜皮水提液均可提高过氧化氢损伤后的细胞存活率.Western Blot检测结果表明冬瓜皮水提液可上调Bcl-2/Bax,下调Bax、Caspase-3 蛋白表达;ROS检测结果显示,与过氧化氢模型组相比,冬瓜皮水提液三个浓度组ROS水平均明显降低;ELISA检测结果显示冬瓜皮水提液可降低损伤细胞TNF-α和IL-1β水平.结论 通过生物信息学方法可挖掘潜在的抗青光眼中药,实验验证可知其中冬瓜皮水提液对视网膜神经节细胞具有保护作用,其作用机制可能与抗炎和抗氧化损伤相关.
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