换一批Raf-1蛋白突变体的原核表达、纯化及活性鉴定
Prokaryotic expression and purification of Raf-1 mutant and evaluation of its bioactivity
摘要目的:将Raf-1蛋白259位丝氨酸(Ser,S)突变成天冬氨酸(Asp,D),构建突变型GST-Raf-1220-268S259D原核表达载体,表达和纯化融合蛋白及鉴定其生物学活性.方法:以pGE X-4T-1-Raf-1220-268为模板,运用PCR定点突变技术扩增出Raf-1220-268S259D基因序列,插入原核表达载体pGEX-6P-1,表达和纯化重组蛋白,GST沉降实验鉴定蛋白的生物学活性.结果:重组质粒测序结果正确,获得模拟磷酸化GST-Raf-1220-268蛋白.GST沉降实验检测到目的蛋白和14-3-3蛋白具有体外特异性结合活性.结论:成功构建GST-Raf-1220-268S259D原核表达载体,并表达及纯化了有生物学活性的融合蛋白,为进一步针对Raf-1的研究提供实验依据.
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DOI
10.3969/j.issn.1006-5725.2012.10.008
发布时间
2013-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家973重点基础研究发展计划（(2011CB910701)）
广东省自然科学基金（(9151065004000005)）
暨南大学特殊人才启动基金（(50624001)）
广东省高等学校高层次人才项目（(50524006)）
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