携人胰岛素基因的“可控”型腺病毒载体的构建与初步验证

Construction and preliminary validation of a new "Controllable" recombinant adenovirus vector carrying human insulin gene

二维码有效期 120s

摘要目的：设计并构建一种“可控”型腺病毒载体，该腺病毒载体在加入诱导剂后能自行消亡，从而解决其激发宿主免疫及产生复制型腺病毒等问题，为临床提供一种更安全的外源基因载体。方法：以传统AdEasyTM腺病毒载体系统为基础，将Cre-LoxP定点敲除系统的Cre酶基因安置在Tet-On诱导表达系统的下游，而在穿梭质粒右臂基因组上下游分别插入一个LoxP位点，构建成“可控”型腺病毒穿梭质粒，并插入全长人胰岛素基因，感染大鼠骨髓间充质干细胞，观察诱导剂加入前后细胞荧光蛋白表达及人胰岛素分泌情况。结果：成功构建携全长人胰岛素基因的“可控”型重组腺病毒AdEasyN／INS，转染QBI-293A细胞和大鼠骨髓间充质干细胞后，均可观察到绿色荧光的表达，在加入诱导剂Dox后，荧光细胞数／总细胞数的比值及胰岛素水平均显著降低。结论：成功构建了携带人胰岛素全长基因的新型“可控”型腺病毒载体，该新型重组腺病毒可像传统载体一样感染BMCs，且能加入诱导剂后迅速降解，实现了外源基因载体的可控性。