人博卡病毒重组蛋白表达及间接酶联免疫法检测的建立

Expression of recombinant protein VP2 of human bocavirus and detection by indirect ELISA

二维码有效期 120s

摘要目的：原核表达并纯化人博卡病毒结构蛋白 VP2，并建立间接酶联免疫法，用于病毒感染的检测。方法：本研究采用PCR法从菌种模板WHL-1扩增出人博卡病毒结构蛋白VP2基因片段，克隆至表达载体pET28a中，转化到菌BL21（DE3），经过诱导产生融合蛋白，使用Western blot 检测，并以该蛋白为包被抗原建立检测血清人博卡病毒的间接酶联免疫法。结果：重组原核表达质粒经双酶切鉴定构建正确，并可与人博卡病毒 IgG阳性血清发生特异性反应，建立的间接酶联免疫法最佳抗原包被浓度为2 mg／mL ，血清的最佳稀释倍数为1∶200，封闭以1％BSA封闭效果最佳，酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4000，工作时间最佳为1 h，该检测方法有较好的特异性和重复性。建立的间接 ELISA 方法 Cut-off 值为0．1，灵敏度为92％，特异性为98％，与对照试剂检测结果的符合率为97％。结论：原核表达并纯化了人博卡病毒结构蛋白VP2蛋白建立的间接酶联免疫法，为人博卡病毒的血清抗体检测方法提供了依据。