换一批
换一批超声微泡介导Caprin-1-KO转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及cyclinD1、cyclinD2表达的影响
Effects of the proliferation,cycle and the expression of cyclinD1 and cyclinD2 in human hepatoma HepG2 cells after Caprin-1-KO transfection mediated by ultrasound-microbubbles
摘要目的 构建筛选最优Caprin-1敲除质粒并探讨超声微泡介导其转染对人肝癌HepG2细胞中cyclinD1、cyclinD2的表达及细胞增殖、周期的影响.方法 构建Caprin-1敲除质粒KO-1、KO-2,测序鉴定重组质粒,将目的质粒转染入人肝癌HepG2细胞,超声转染条件利用前期研究成果,免疫印迹法(WB)筛选最优质粒,实时荧光定量PCR(qPCR)检测抑制Caprin-1表达后cyclinD1及cyclinD2表达情况,细胞增殖实验(CCK-8法)及流式细胞术(FCM)检测抑制Caprin-1表达对细胞增殖与周期的影响.结果 设计Caprin-1敲除质粒Caprin-1-KO-1、Caprin-1-KO-2引物序列,提取质粒经过电泳及测序,鉴定质粒构建成功.转染目的质粒后,KO-2组Caprin-1表达显著降低,与阴性对照组(NC)、KO-1组比较,差异有统计学意义(P<0.05);且抑制Caprin-1表达明显抑制HepG2细胞的增殖,阻滞了细胞周期,cyclinD1,cyclinD2表达均明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 超声微泡介导Caprin-1-KO转染人肝癌HepG2细胞,Caprin-1-KO对人肝癌HepG2细胞增殖有抑制作用并使细胞周期发生阻滞,cyclinD1及cyclinD2表达下降,为进一步研究Caprin-1在肝癌发病机理中的作用提供思路.
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