利用慢病毒载体构建过表达人TCRP1基因的慢性髓系白血病K562细胞系及其生物学功能检测

Construction of chronic myeloid leukemia K562 cell line with overexpression of human TCRP1 gene based on lentivirus vector and its biological function detection

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摘要目的利用慢病毒载体构建过表达人舌癌耐药相关基因(TCRP1)的慢性髓系白血病(CML)K562细胞系并检测其生物学功能.方法将TCRP1的重组质粒与包装质粒共转染293T细胞,收集病毒液测定滴度后感染K562细胞,使用嘌呤霉素筛选TCRP1过表达的细胞株K562/TCRP1,荧光定量PCR和Western blot方法检测TCRP1的表达,采用连续细胞计数法和CCK-8法分别对K562/TCRP1及其对照细胞株的增殖情况进行检测,并分析2个细胞株对不同浓度的伊马替尼(IM)的药物敏感性.结果 TCRP1慢病毒表达载体成功转染进入K562细胞,荧光定量PCR和Western blot结果显示K562/TCRP1细胞株的TCRP1表达在mRNA水平和蛋白水平均显著高于对照组,连续细胞计数法和CCK-8法结果表明K562/TCRP1细胞的增殖能力和细胞活力增强,IM处理K562/TCRP1细胞的IC50值显著高于其对照细胞(P<0.05).结论利用慢病毒载体成功构建了TCRP1过表达的K562细胞株,并且发现TCRP1的过表达可能增强K562细胞的增殖能力和IM耐药能力,为进一步探讨TCRP1在慢性髓系白血病发病机制中的可能作用提供基础.

作者刘孝荣 ^[1] 何悦 ^[2] 陈妍 ^[2] 辛泽锋 ^[3] 邓栩文 ^[3] 钟惠锋 ^[4] 陈运生 ^[2] 学术成果认领

作者单位深圳市儿童医院检验科(广东深圳 518034);深圳市儿童医院儿科研究所(广东深圳 518034) ^[1] 深圳市儿童医院检验科(广东深圳 518034) ^[2] 深圳市儿童医院儿科研究所(广东深圳 518034) ^[3] 深圳市儿童医院血液肿瘤科 (广东深圳 518034) ^[4]

关键词 TCRP1 过表达 K562细胞慢性髓系白血病 tongue cancer drug resistance related gene 1 overexpression K562 cell line chronic myelocytic leukemia

分类号 R733.72

栏目名称 基础研究

DOI 10.3969/j.issn.1006-5725.2023.19.008

发布时间 2023-12-05

基金项目

广东省自然科学基金项目 深圳市科技计划项目