换一批脂肪酸结合蛋白5结合Vimentin蛋白在肝癌中的作用机制
Study on the mechanism of fatty acid binding protein 5 binding Vimentin protein in the Hepatocellular Carcinoma cells
摘要目的 筛选和验证与脂肪酸结合蛋白5(FABP5)结合的互作蛋白,同时研究FABP5与候选蛋白的调控关系,进一步探讨FABP5在肝癌中的作用机制.方法 采用免疫沉淀联合串联质谱分析方法(IP-MS)筛选出与FABP5相互结合的蛋白;通过免疫共沉淀实验(Co-IP)从外源性和内源性层面验证FABP5与候选互作蛋白的结合关系;利用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法观察敲低FABP5对肝癌细胞中波形蛋白(Vimentin)转录和翻译水平的影响;通过鬼笔环肽染色实验观察过表达FABP5对肝癌细胞骨架的影响.结果 IP-MS鉴定出336个与FABP5相互结合的潜在靶蛋白,结合文献,挑选出5个与肿瘤相关的候选蛋白,分别为PRDX1、PRSS3、PKM、HSP90AA1和Vimentin蛋白.通过外源性和内源性Co-IP实验证实FABP5与Vimentin蛋白存在结合关系.敲低FABP5对肝癌细胞中Vimentin mRNA的表达没有显著作用,但可抑制Vimentin蛋白的表达,而过表达FABP5会影响肝癌细胞的骨架.结论 FABP5促进肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与FABP5结合调控Vimentin蛋白和影响细胞骨架重塑有关,有望成为抗肝癌的潜在靶点,为肝癌的治疗提供新的思路.
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关键词
脂肪酸结合蛋白5波纹蛋白肝癌质谱互作蛋白fatty acid binding protein 5Vimentinliver cancermass spectrometryinteracting protein
分类号
R735.7（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-5725.2024.06.005
发布时间
2024-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（82060431）
教育部重点实验室开放基金（GKE-ZZ202208）
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