Neuritin对鸡胚尿囊膜及人脐静脉内皮细胞血管生成作用的影响
Effect of Neuritin on angiogenesis of chicken embryo alantoic membrane and humar umbilical vein endo-thelial cells
摘要目的 探究神经营养因子Neuritin过表达对鸡胚尿囊膜(CAM)和人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)血管生成作用的影响,为治疗血管生成性疾病提供新方向.方法 选择新鲜黄皮种蛋30枚建立CAM模型,采用随机数字表法分为3组:阳性对照组(bFGF)、阴性对照组(NS)和实验组(Neuritin),每组10枚.阳性对照组载入2500 U/mL的bFGF,实验组载入10μg/mL的Neuritin蛋白,阴性对照组载入NS,各组载入量均为10μL且所有CAM的培养温度、相对湿度及孵育时间相同,记录孵育72 h后各组CAM的血管分支、数目及大小.选择健康孕妇的新鲜脐带制作原代HUVECs,将其分为3组:转染重组质粒组(HUVEC-neu组)、转染空载体组(HUVEC-3.1组)和未转染组(HUVEC组).HUVEC-neu组的原代HUVECs经重组质粒Neuritin转染,HUVEC-3.1组经空载体质粒转染,HUVEC组不给予特殊处理,3组均接受相同的传代培养方案.Western blot检测Neuritin在HUVEC-3.1组与HUVEC-neu组的蛋白表达水平.CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验和管型形成实验检测HUVEC-3.1组和HUVEC-neu组的细胞增殖、迁移和管型形成能力.结果(1)实验组的CAM血管分支点数及微小血管数较阴性对照组明显增加(P<0.01),但两组的大、中血管数差异无统计学意义(P>0.05);(2)HUVEC-neu组中Neuritin在HUVECs成功过表达.(3)与HUVEC-3.1组相比,HUVEC-neu组的细胞增殖活力下降(P<0.05),但其迁移、管型形成能力明显增强(P<0.01).结论 Neuritin过表达可促进血管生成,通过影响细胞增殖、迁移和管型形成能力参与新生血管的调控.
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