Toll样受体4在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞铁死亡中的作用

Role of Toll-like receptor 4 in regulation of homocysteine-induced ferroptosis in macrophages

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摘要目的探讨Toll 样受体4在调控同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导巨噬细胞铁死亡中的作用.方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,设置对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)和同型半胱氨酸+铁死亡抑制剂组(Hcy+Fer-1);巨噬细胞转染干扰片段后予同型半胱氨酸干预,设置对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)、TLR4干扰阴性对照+同型半胱氨酸干预组(si-NC+Hcy)、TLR4干扰+同型半胱氨酸干预组(si-TLR4+Hcy);巨噬细胞转染过表达慢病毒后予同型半胱氨酸干预,对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)、TLR4过表达阴性对照+同型半胱氨酸干预组(OE-NC+Hcy)、TLR4过表达+同型半胱氨酸干预组(OE-TLR4+Hcy);干预细胞48 h后,实时荧光定量PCR和Western blot检测Hcy干预的巨噬细胞中TLR4表达水平;Western blot检测巨噬细胞中铁死亡相关蛋白ACSL4、GPX4及FTH1表达水平;采用铁离子试剂盒检测巨噬细胞内Fe2+浓度;采用ROS试剂盒及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧的含量.结果与Control组相比,Hcy组促铁死亡相关蛋白ACSL4的表达水平升高(P<0.05),抗铁死亡相关蛋白GPX4与FTH1的表达水平降低(P<0.05),Fe2+浓度升高(P<0.05),ROS含量增多,同时Hcy组中TLR4蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05);巨噬细胞转染TLR4干扰片段后,与si-NC+Hcy组相比,si-TLR4+Hcy组中GPX4与FTH1表达水平增高(P<0.05),ACSL4表达水平降低(P<0.05),Fe2+浓度降低(P<0.05),ROS含量减少;巨噬细胞转染TLR4过表达慢病毒后,与OE-NC+Hcy组相比,OE-TLR4+Hcy组中GPX4与FTH1表达水平降低(P<0.05),ACSL4表达水平升高(P<0.05).结论 Hcy诱导巨噬细胞铁死亡的发生,而Toll样受体4对Hcy诱导的巨噬细胞铁死亡有正向调控作用.

作者 翟俊杰 ^[1] 温少莹 ^[2] 李心如 ^[3] 孙睿 ^[4] 祁宁 ^[4] 张启凡 ^[4] 杨力 ^[5] 黄晖 ^[5] 马凌桔 ^[6] 郝银菊 ^[1] 姜怡邓 ^[1] 李桂忠 ^[2] 马胜超 ^[2] 学术成果认领

作者单位 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏银川 750004) ^[1] 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏银川 750004);宁夏医科大学基础医学院(宁夏银川 750004) ^[2] 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏银川 750004);宁夏医科大学检验学院(宁夏银川 750004) ^[3] 宁夏医科大学检验学院(宁夏银川 750004) ^[4] 宁夏医科大学总医院老年与特需医学科(宁夏银川 750004) ^[5] 国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏银川 750004);宁夏医科大学总医院老年与特需医学科(宁夏银川 750004) ^[6]

关键词 TLR4 巨噬细胞同型半胱氨酸铁死亡 TLR4 macrophages homocysteine ferroptosis

分类号 R34

栏目名称

基础研究

DOI 10.3969/j.issn.1006-5725.2025.03.002

发布时间 2025-03-05

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