摘要目的 研究脓毒症时小鼠骨髓巨核细胞发生程序性死亡(坏死性凋亡、凋亡、自噬、铁死亡和焦亡)的情况及其对产血小板能力、小鼠凝血功能的影响.方法 将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham组)和脓毒症模型组(CLP组).Sham组与CLP组小鼠于术后24 h进行腹主动脉采血测定外周血血小板及凝血功能,小鼠处死后取双下肢长骨,经巨核细胞分离液和免疫磁珠分选法提取骨髓巨核细胞.激光共聚焦显微镜观察程序性死亡相关标志分子在小鼠骨髓巨核细胞中的活化情况,流式细胞仪检测巨核细胞程序性死亡率、产血小板表型及血小板表面标志物(CD41、CD42b、CD61),Western blot检测巨核细胞中程序性死亡相关蛋白的表达情况.结果 与Sham组相比,CLP组小鼠血小板数量在急性脓毒症期(24 h)较假手术组明显下降(P<0.01),血小板分布宽度(PDW)和平均血小板体积(MPV)则显著上升(P<0.01);凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)显著延长(P<0.01),而纤维蛋白原(FIB)显著降低(P<0.01).与Con/Sham组相比,LPS/CLP组巨核细胞产血小板表型、上清液中PLP数量及血小板表面标志物(CD41、CD42b、CD61)表达水平均显著上升.巨核细胞坏死性凋亡、凋亡、焦亡、铁死亡率在CLP术后24 h显著升高.激光共聚焦显微镜观察显示,CLP术后小鼠巨核细胞LC3、P-MLKL、Caspase-1、Fe2+活化明显.Western blot检测结果显示,CLP组巨核细胞坏死性凋亡相关蛋白P-MLKL的活化率较Sham组显著上升(P<0.01);焦亡相关蛋白GSDMD及GSDMD-N剪切显著增加(P<0.01);铁死亡相关蛋白ACSL4表达显著上升(P<0.01),GPX4表达显著降低(P<0.01);凋亡相关蛋白Bax表达显著上升(P<0.05);自噬相关蛋白LC3B-II剪切显著增加(P<0.01),P62表达显著降低(P<0.01).而使用细胞程序性死亡抑制剂抑制凋亡后巨核细胞产血小板功能下降,抑制坏死性凋亡和焦亡对巨核细胞产血小板功能的影响有限,抑制铁死亡及自噬能增强巨核细胞的产血小板功能.结论 在脓毒症急性期(24 h)可见明显的巨核细胞程序性死亡.其中,凋亡是巨核细胞产血小板表型分化及产血小板能力升高的重要机制;而巨核细胞过度自噬反应及铁死亡可能导致巨核细胞功能障碍,是脓毒症凝血异常的重要机制.