换一批去泛素酶复合体Ubp3/Bre5的制备及与Cdc48作用
Preparation of full-length deubiquitinating complex Ubp3/Bre5 and characterization of interaction with Cdc48
摘要泛素化是一种存在于真核细胞中与生理功能密切相关的蛋白修饰，泛素化与去泛素化处于动态调节过程中。 Ubp3是与人USP10同源的酵母去泛素化酶，结合辅引子Bre5在细胞内发挥广泛作用。为研究该复合体的工作机制，制备重组蛋白复合体，在大肠杆菌中成功表达并纯化重组Ubp3与Bre5单体及Ubp3/Bre5复合体，首次成功大规模制备重组Ubp3/Bre5复合体。通过一系列pulldown实验，检验Ubp3/Bre5与AAA家族中泛素选择性ATP酶Cdc48的相互作用模式，结果发现， Ubp3及Bre5无法单独与Cdc48结合，但Ubp3/Bre5复合体可以有效与Cdc48相互作用。提出了Ubp3/Bre5-Cdc48相互作用的新模式，制备了高质量重组Ubp3/Bre5复合体。该研究为通过生化及结构生物学进行分子机制探索奠定了基础。
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关键词
结合蛋白质Ubp3去泛素化酶结合辅因子Bre5ATP酶Cdc48去泛素化复合体与谷光苷肽巯基转移酶沉淀试验直接相互作用protein bindingdeubiquitinase Ubp3cofactor Bre5ATPase Cdc48deubiquitinating complexGST-pulldowndirect interaction
分类号
Q513（蛋白质）
栏目名称
DOI
10.3724/SP.J.1249.2015.01058
发布时间
2015-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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