换一批摘要目的 建立和优化地龙ISSR-PCR反应体系.方法 以地龙药材为实验试材,采用异丙醇沉淀法提取了地龙总DNA模板,对地龙ISSR-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选.结果 建立了标记位点清晰、稳定、重复性好,可用于地龙ISSR分析的最佳反应体系,50 μl体系中含有:1×Taq酶配套缓冲液,DNA模板50 ng,2.5U Taq DNA聚合酶,2 mmol/L MgCl2,0.8 μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTPs.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;72℃延伸5 min,反应结束后,4℃保存.结论 这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行地龙类药用动物鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.
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关键词
地龙ISSR反应体系建立和优化EarthwormInter Simple Sequence RepeatReaction systemEstablishment and optimization
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-0805.2009.07.003
发布时间
2009-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30772741）
高等学校博士学科点专项科研基金（20050572004）
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