加味阳和汤含药血清联合转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响
Effect of Jiawei Yanghe Decoction containing serum combined with transforming growth factor β1 on chondrogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells
摘要目的 探究加味阳和汤含药血清联合转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响.方法 全骨髓贴壁培养法分离培养SD大鼠BMSCs,并进行流式细胞术鉴定;CCK-8实验筛选出加味阳和汤含药血清促进BMSCs增殖的最佳有效浓度;将第3代BMSCs分为空白对照组、加味阳和汤含药血清组(含药血清组)、TGF-β1组(阳性对照组)、加味阳和汤含药血清联合TGF-β1组(联合组),诱导分化21d后,阿利新蓝染色检测软骨特异性基质蛋白糖胺聚糖生成;RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨分化标记基因SOX-9、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的基因蛋白表达.结果 ①阿利新蓝染色显示,空白对照组未见明显软骨特异性基质蛋白糖胺聚糖(呈蓝色)产生,其余3组可见明显糖胺聚糖生成,其中联合组效果最佳;②与空白对照组比较,Aggrecan、Col Ⅱ及SOX-9的基因蛋白表达均明显升高(P<0.05),其中联合组效果最佳(P<0.01),且明显优于含药血清组和阳性对照组.结论 加味阳和汤含药血清在一定浓度范围内可以促进大鼠BMSCs增殖;加味阳和汤含药血清可以诱导大鼠BMSCs成软骨细胞分化,其与TGF-β1联合使用具有协同促进作用.
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