基于PKC/ERK通路探讨益肾达络饮对脂多糖诱导的星形胶质细胞活化的作用机制

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摘要目的基于PKC/ERK通路探讨益肾达络饮对脂多糖诱导的星形胶质细胞的作用机制.方法将60只C57BL/6 J雌性小鼠随机分为分为空白组,激素组和益肾达络饮高、中、低剂量组,其中正常组20只(其中空白组10只,模型组10只),其余每组10只,空白组给予生理盐水,其余各组给予相应药物处理,连续灌胃7 d,最后一次灌胃2 h后眼球取血,制备空白血清和含药血清.提取新生48 h C57BL/6 J乳鼠原代星形胶质细胞,以脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞活化,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)作为星形胶质细胞鉴定和活化的标志,实验分为空白组、模型组、益肾达络饮高、中、低剂量组、激素组,给予相应血清预处理24 h,除空白组外其余各组加入1 μg/mL LPS作用24 h诱导星形胶质细胞活化,CCK-8检测各组细胞活性,免疫荧光法检测细胞GFAP表达变化,蛋白免疫印迹法检测细胞蛋白激酶C(PKC)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK和GFAP的蛋白表达.结果与空白组比较,模型组细胞活性、GFAP、PKC和p-ERK/ERK蛋白表达量显著升高(P＜0.01),且细胞体明显变大;与模型组比较,益肾达络饮高、中、低剂量组和激素组细胞活性和PKC蛋白表达量显著降低(P＜0.01),益肾达络饮高剂量组和低剂量组GFAP和p-ERK/ERK蛋白表达量显著降低(P＜0.01或P＜0.05),益肾达络饮中剂量组p-ERK/ERK蛋白表达量显著降低(P＜0.01),激素组GFAP蛋白表达量显著降低(P＜0.01).结论益肾达络饮可以改善由LPS所引起的星形胶质细胞的活化,降低GFAP的表达,抑制炎症反应,其作用机制可能与抑制PKC/ERK通路的激活有关.