换一批基于HDAC6调控NLRP3转运的生骨再造丸对BMSCs焦亡水平影响的探讨
Exploring the effect of Shenggu Zaizao Pill on the pyroptosis level of BMSCs through regula-ting NLRP3 transport based on HDAC6
摘要目的 从组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)转运的角度,探讨生骨再造丸对骨髓间充质干细胞(BMSCs)焦亡水平的影响.方法 购买原代兔BMSCs,制备焦亡BMSCs模型,采用HDAC6 激动剂(Theophylline)与抑制剂(Trichostain A)对焦亡的BMSCs进行干预;制备生骨再造丸含药血清,对焦亡的BMSCs进行干预.将上述细胞分为空白组、模型组、模型组+HDAC6 激动剂组(模型组+Theophylline)、模型组+HDAC6 抑制剂组(模型组+Trichostain A)、模型组+生骨再造丸含药血清组.采用CCK-8 法检测BMSCs活力及含药血清对BMSCs的最佳干预时间;采用PCR法检测各组BMSCs中膜孔蛋白D(GSDMD)的基因水平;采用WB法检测各组BMSCs中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、GSDMD、NLRP3 蛋白表达;采用ELISA法检测各组BMSCs中HDAC6、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素 18(IL-18)含量.结果 与空白组相比,模型组细胞 GSDMD mRNA 水平上升(P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白水平显著升高(P<0.05),HDAC6 含量明显升高(P<0.05),IL-18、IL-1β水平上升(P<0.05).与模型组相比,模型组+HDAC6 激动剂组中细胞GSDMDmRNA水平上升(P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白水平明显升高(P<0.05),HDAC6 含量明显升高(P<0.05),IL-18、IL-1β水平上升(P<0.05);模型组+HDAC6 抑制剂组中细胞GSDMD mRNA 水平下降(P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白水平降低(P<0.05),HDAC6 含量降低(P<0.05),IL-18、IL-1β水平降低(P<0.05);模型组+生骨再造丸含药血清组中细胞GSDMDmRNA水平明显下降(P<0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白水平明显降低(P<0.05),HDAC6 含量明显降低(P<0.05),IL-18、IL-1β水平明显降低(P<0.05).结论 生骨再造丸通过抑制HDAC6 的活性,抑制NLRP3 炎症小体的激活,可以有效改善BMSCs焦亡水平.
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