双黄连及拆方对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力因子的作用研究
Effect of Shuanghuanglian(双黄连)and its disassembled formulas on virulence factors of me-thicillin-resistant Staphylococcus aureus
摘要目的 探究双黄连及其各药在亚抑菌浓度下对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)毒力因子α-溶血素(Hla)和分选酶A(SrtA)活性的影响,为临床中药治疗感染性疾病提供新思路.方法 采用纸片扩散、最低抑菌浓度(MIC)和时间-生长曲线评估双黄连及各药对MRSA生长的影响;溶血实验、Hla中和实验、蛋白免疫印迹法探究双黄连及各药对Hla活性影响及作用机制;荧光共振能量转移测定法(FRET)、生物被膜形成和分子对接技术鉴定双黄连及各药对SrtA的活性影响及作用机制.结果 双黄连整方MIC为16 mg.mL-1,抑菌圈比值为(66.11±14.92)%.1/32 MIC浓度的双黄连即可抑制和中和Hla的作用,且浓度越高抑制作用越强,呈浓度依赖性(P<0.01).FRET结果证实双黄连对SrtA活性有抑制作用,抑制率为86.1%.与对照组相比,1/8 MIC浓度即表现对生物被膜明显抑制作用.分子对接结果显示SrtA与双黄连中主要抑菌活性成分有较好的结合能力.单味药中连翘抑菌能力强,MIC为16 mg·mL-1,在亚抑菌浓度下只影响溶血活性及生物被膜的形成但不抑制细菌的生长.金银花、黄芩不仅影响溶血活性以及生物被膜形成,还对SrtA活性产生抑制作用.其中金银花溶血效果强,在1/32 MIC浓度时即可显著抑制和中和Hla的作用,而黄芩在相同浓度下对生物被膜抑制作用显著(P<0.001).3味药不同程度对SrtA和Hla的活性发挥抑制作用.结论 双黄连及各药在亚抑菌浓度下不影响MRSA的生长,但全方共同作用抑制Hla和SrtA的活性,从而减弱MRSA的毒性.
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