换一批一种早胚发育促进因子"DPF-1”cDNA的表达、纯化及其抗体的制备
Expression of Rabbit DPF-1 Gene and Preparation of Antibodies to DPF-1
摘要目的:表达纯化GST-DPF-1融合蛋白,制备抗DPF-1抗体,用抗DPF-1抗体进行功能封闭实验.方法:用EcoRI和NotI双酶切pBluescriptIIKS/1.9kb DPF-1 cDNA,得到1.9kb DPF-1 cDNA;HincII酶切该片段,得到1.8 kb DPF-1 cDNA;SmaI与NotI双酶切GST融合基因表达载体pGEX-4T-3,得到线性pGEX-4T-3载体;1.8kb DPF-1 cDNA与线性pGEX-4T-3载体连接,构建了重组pGEX-4T-3/DPF-1 cDNA.带有重组质粒的DE3菌37℃培养,IPTG诱导,菌体裂解及蛋白纯化.融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,抗血清经GST吸附.结果:获得的GST-DPF-1融合蛋白和针对DPF-1的抗体具有较好的专一性.经GST吸附后的抗DPF-1抗血清可使条件培液中的昆明小鼠受精卵全部被阻断于2-细胞期.结论:该抗体可用于天然DPF-1的纯化、DPF-1功能及作用机制的研究.
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DOI
10.3969/j.issn.0253-357X.2001.03.003
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（39730460）
国家重点基础研究发展计划（973计划）（G1999055902）
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