hGM-CSF受体β亚单位胞浆域在配体胞吞过程中的作用

Role of the Cytoplasmic Domain of β Subunit of the Human Granulo cyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptor in Ligand Endocytosis

摘要目的探索人粒-巨噬细胞集落刺激因子受体(hGM-R)β亚单位胞浆域在配体诱导的胞吞过程中的作用.方法通过PCR扩增技术,构建β亚单位胞浆域缺失突变子(1441、1582、1726、2354和Sma),然后将野生型或突变型β亚单位和GM-Rα亚单位cDNA共转染入COS-7细胞,并对转染细胞的配体胞吞进行检测.结果以低亲和力方式与配体结合的COS-GM-Rα胞吞水平仅为结合配体的7%,而以高亲和力方式与配体结合的COS-GM-Rα/β胞吞水平则达37%,为前者的5倍,这种胞吞现象可被丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂H-7和星形孢菌素抑制,但不被酪氨酸激酶抑制剂木黄酮和制表菌所抑制;从β亚单位胞浆域结构与胞吞关系可见,C末端122个氨基酸缺失可使胞吞受抑,而该122个氨基酸上游的300个氨基酸区域缺失则可使胞吞水平显著提高.结论有效的胞吞需要高亲和结合力的功能受体存在,且胞吞过程不涉及酪氨酸激酶磷酸化;而β亚单位胞浆域对胞吞有正性或负性调节作用,提示这些区域含有调节胞吞过程的序列.