换一批rhIL-13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究
Expression of Recombinant Human Interleukin-13 in Pichia Pastoris and Its Bioactivity in Vitro
摘要目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素-13（rhIL-13），便于进一步研究开发。方法 根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL-13编码基因片段，经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL-13 cDNA全长序列；将其插入pPICZαA质粒中，构建成pPICZαA-IL-13表达载体；该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中，经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL-13表达阳性菌株；用Western Blotting 和ELISA检测发酵上清中IL-13的抗原性和表达量，B9-11细胞株分析其生物学活性。结果 15% SDS-PAGE显示重组人IL-13分子量约13kd，Western-blotting证实为人 IL-13，ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达15μg/ml，其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论 成功获得IL-13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株，该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。
更多相关知识
分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-0399.2001.02.003
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（39870825）
江苏省科技厅自然科学研究项目（13198100）
- 浏览140
- 被引5
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
