换一批人4-1BB转基因细胞的构建及体外生物学功能的研究
Construction of Human 4-1BB Transfectant Cell Line and the Study of Its Bioactivity in Vitro
摘要目的构建人共刺激分子4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能.方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因,经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,重组逆转录病毒载体4-1BB/pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染重新铺板的293T细胞,加入Zeocin选择性培养基进行筛选.经RT-PCR、Western blot、流式细胞仪表型检测等方法鉴定转基因细胞;3H-TdR掺入法分析转基因细胞对T细胞的作用;DCs 培养过程中,加入转基因细胞与激发型CD40单抗5C11,流式细胞仪分析DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达.结果成功构建了能稳定表达人4-1BB蛋白的转基因细胞4-1BB/293T,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,可协同5C11促进DCs的体外成熟,上调DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达.结论稳定表达4-1BB蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础.
更多相关知识
分类号
R392.2（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-0399.2006.01.015
发布时间
2006-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览138
- 被引2
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
