换一批
换一批辐射敏感性新基因 UHRF1真核表达载体的构建及鉴定
Construction and Identification of Eukaryotic Expression Vector of pcDNA3-UHRF1
摘要目的 构建UHRF1的真核表达载体,并验证其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达.方法 采用RTPCR方法,从乳腺癌细胞MCF-7的总cDNA中扩增出2.3kb 的 UHRF1基因的cDNA片段,经限制性内切酶Kpn I与Xho I双酶切,定向克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pcDNA3(+)-UHRF1,利用限制性内切酶双酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;构建成功的重组质粒,经脂质体Lipofactamin2000介导转染MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆,以RT-PCR 和 Western blot 检测 UHRF1 的mRNA和蛋白的表达.结果 获得全长约为2.3kb的UHRF1基因片段;重组质粒经限制性内切酶Xho I和Kpn I酶切、电泳后显示2.3kb的UHRF1目的片段和5.4kb的pcDNA3载体片段,即UHRF1基因的cDNA已正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中;UHRF1转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后的RT-PCR和Western blot的结果显示:UHRF1的mRNA和蛋白水平均呈现高表达.结论 成功构建UHRF1基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定基础.
更多相关知识
分类号
R811.5
栏目名称
专题研究
发布时间
2011-08-16
基金项目
国家自然科学基金资助项目
苏州市社会发展基金资助项目
江苏省高校自然科学研究资助项目
苏州市肿瘤放射生物学重点实验室基金资助项目
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