冷冻技术对精子印记基因DNA甲基化影响的研究

Effect of cryopreservation on DNA methylation status of imprinted genes in human sperm

二维码有效期 120s

摘要目的检测常规精液冷冻技术中冷冻保护剂、冷冻过程及冷冻时间长短对精子父源印记基因H19及母源印记基因MEST印记控制区域(imprinting control region,ICR)的DNA甲基化的影响程度. 方法以10例符合精子库捐精条件的正式志愿者为研究对象,将每份精液样品平均分为4组:A组为新鲜精液,作为对照;B组加入同体积冷冻保护剂,不冷冻;C组加同体积冷冻保护剂,冷冻2d;D组加同等体积冷冻保护剂,冷冻两个月.通过亚硫酸氢盐克隆测序法分析H19及MEST ICR的DNA甲基化状态. 结果四组(A、B、C、D组)H19基因ICR区的DNA甲基化率以克隆数计算时分别为58.70％、53.85％、49.46％和45.74％,以CpG岛数计算时分别为97.57％、97.33％、97.13％和96.56％,两者都有降低趋势,但组间差异均无统计学意义(P＞0.05);四组MEST基因ICR区甲基化率以克隆数计算时分别为41.10％、45.33％、47.30％和50.68％,以CpG岛数计算甲基化率时分别为1.77％、1.74％、2.00％和2.26％,有升高趋势,但差异亦无统计学意义(P＞0.05). 结论常规精液冷冻复苏技术对精子父源印记基因H19及母源印记基因MEST的ICR区甲基化程度未见明显影响.