敲低锌转运蛋白ZIP7抑制小鼠睾丸支持细胞增殖的研究

Knockdown of the zinc transporter protein ZIP7 to inhibit the proliferation of mouse testicular sertoli cells

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摘要目的探讨敲低锌转运蛋白ZIP7对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响及其可能的作用机制.方法使用小鼠睾丸支持细胞系(TM4细胞)进行实验,TM4细胞培养后采用细胞免疫荧光染色法观察ZIP7在TM4细胞中的亚细胞定位;将TM4细胞分为对照组和ZIP7 siRNA组(采用siRNA转染敲低TM4细胞中ZIP7表达),采用CCK8法检测两组细胞的增殖能力,使用DHE荧光探针检测两组细胞内活性氧(ROS)的水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组细胞内ZIP7 mRNA的相对表达量,Western blot法检测两组细胞内ZIP7、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平.结果细胞免疫荧光染色法结果显示ZIP7定位于TM4细胞的内质网上.siRNA干扰使得ZIP7 siRNA组细胞中ZIP7的mRNA和蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05);siRNA转染敲低TM4细胞内ZIP7的表达后,ZIP7 siRNA组细胞增殖能力显著低于对照组(P＜0.001),细胞内ROS水平显著高于对照组(P＜0.001).与对照组比较,ZIP7 siRNA组细胞的p-ERK/ERK蛋白表达无显著差异(P＞0.05),而p-JNK/JNK蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论敲低ZIP7可以明显抑制TM4细胞增殖,该过程可能通过细胞内ROS水平的升高及JNK磷酸化的激活介导.

作者特力格尔 ^[1] 刘璇 ^[1] 李媛静 ^[2] 李欢欢 ^[3] 王树松 ^[4] 马婧 ^[3] 学术成果认领

作者单位河北医科大学研究生院,石家庄 050017 ^[1] 河北师范大学化学与材料科学学院,石家庄 050024 ^[2] 河北省生殖健康医院河北省生殖医学重点实验室,石家庄 050071 ^[3] 河北医科大学研究生院,石家庄 050017;河北师范大学化学与材料科学学院,石家庄 050024;河北省生殖健康医院河北省生殖医学重点实验室,石家庄 050071 ^[4]

关键词锌转运蛋白小鼠睾丸支持细胞活性氧 c-Jun氨基末端激酶细胞增殖 Zinc transporter protein Mouse testicular sertoli cells Reactive oxygen species c-Jun N-terminal Kinase Cell proliferation

分类号 Q25 R-332 R339.2+1

栏目名称

实验研究

DOI 10.3969/j.issn.1004-3845.2024.02.010

发布时间 2024-03-20

基金项目

河北省省级科技计划资助项目（226Z7722G）；河北省自然科学基金（H2022314001）；河北省自然科学基金（H2021314001）