过氧化氢通过影响细胞骨架、活性氧和线粒体功能诱发子宫内膜间质细胞的衰老
H2O2 induces senescence in endometrial stromal cells by perturbing cytoskeleton and augmenting reactive oxygen species
摘要目的 探讨过氧化氢(H2O2)诱发子宫内膜间质细胞(ESC)衰老表型及其具体机制.方法 使用200 μmol/L和300 μmol/L H2O2分别诱导ESC细胞氧化损伤1 h和2 h,观察ESC形态变化、脂褐素累积情况及细胞骨架状态变化.将300 μmol/L H2O2处理1 h的ESC细胞作为衰老模型组,未经H2O2处理、常规培养的ESC作为对照组,采用β-半乳糖苷酶试剂盒检测两组ESC中β-半乳糖苷酶水平,采用活性氧(ROS)检测试剂盒和JC-1试剂盒分别检测两组细胞ROS荧光强度和线粒体膜电位,采用实时定量荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测两组ESC中衰老标记物(P21、P16、P53)和血管生成因子(VEGF)、波形蛋白(Vimentin)、雌激素受体α(ERα)的RNA和蛋白表达量变化.结果 H2O2诱导ESC衰老具有浓度依赖性和时间依赖性,随着H2O2处理时间的延长和浓度的增加,ESC由成纤维状态转变为多边形上皮样状态,脂褐素积累增加、细胞骨架微丝蛋白F-actin解聚.和对照组比较,衰老模型组ESC的β-半乳糖苷酶水平显著增加(P<0.001),ROS荧光强度明显增加,线粒体膜电位明显下降,P21、P16、P53、VEGF、ERα、Vimentin的RNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.001).结论 H2O2可以诱发ESC衰老,其机制可能是通过影响细胞骨架状态、ROS水平、线粒体膜电位等发挥作用.
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