聚ADP核糖基转移酶1调节小鼠卵母细胞减数分裂成熟的研究
Research on effects of poly(ADP-ribose)polymerase 1 on meiosis maturation of mouse oocytes
摘要目的 探究聚ADP核糖基转移酶1(PARP1)及其介导的聚ADPr修饰在小鼠卵母细胞减数分裂成熟中的作用.方法 通过卵巢组织免疫荧光、卵母细胞免疫荧光和免疫印迹实验明确PARP1在小鼠卵巢和卵母细胞中的表达和定位.收集3周龄小鼠卵母细胞分为对照组和抑制组:对照组培养基中添加二甲基亚砜(DMSO),抑制组培养基中添加PARP1特异性抑制剂AZD5305.观察两组卵母细胞的发育情况,通过卵母细胞微量转录组测序及实时定量聚合酶链反应(qPCR)、卵母细胞活细胞染色和免疫荧光染色分析两组细胞的转录情况和线粒体功能差异.结果 PARP1在小鼠卵母细胞中表达丰富.与对照组相比,抑制组小鼠卵母细胞减数分裂异常,第一极体排出率显著下降(65.14%vs.82.16%,P<0.05).转录组测序结果显示,与对照组相比,抑制组差异基因中下调基因居多,且下调的基因主要富集在"细胞凋亡"和"蛋白水解"信号通路,qPCR验证结果与测序结果一致.染色结果显示抑制组磷酸化的H2A.X信号增加,线粒体信号降低,线粒体超氧化物信号增加.结论 PARP1及其介导的聚ADPr修饰在小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中发挥重要功能,PARP1功能缺失会引起卵母细胞质量降低.
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