红娘子蛋白提取工艺优化及其对肝癌细胞Bel-7402的影响

Optimization of the Extraction Process of Huechys Sanguinea Protein and its Effect on Liver Cancer Cell Bel-7402

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摘要本研究旨在优化红娘子蛋白提取工艺,考察红娘子生品及炮制品蛋白成分对肝癌细胞Bel-7402的影响.试验以蛋白含量为评价指标,考察料液比、超声时间、溶液pH对红娘子蛋白提取的影响,通过正交试验优选最佳提取工艺.体外研究红娘子生品及炮制品蛋白成分对Bel-7402肝癌细胞的影响,Cell Counting Kit-8检测对细胞活力影响;细胞集落研究对细胞增殖能力影响;划痕试验检测对细胞迁移能力影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测对细胞凋亡影响;Western Blotting检测相关凋亡蛋白的作用机制.红娘子蛋白最佳提取工艺为红娘子粉末加20倍体积水溶液(pH为10.8),冰水浴超声提取150min.生品及炮制品蛋白可显著降低Bel-7402肝癌细胞存活率,具有良好的抑制肝癌细胞增殖能力,可显著抑制肝癌细胞迁移;显著增加Bel-7402肝癌细胞凋亡率,可促进凋亡相关蛋白BCL2-Associated X(Bax)和Caspase-3表达,降低B-cell lymphoma-2(Bcl-2)蛋白表达.优化的红娘子蛋白提取工艺稳定,蛋白含量可达240.55 mg/g.红娘子生品及炮制品蛋白成分均具有较好的抑制Bel-7402肝癌细胞迁移及增殖的能力,其机制可能是通过上调抗凋亡蛋白 Bcl-2蛋白表达、下调促凋亡蛋白 Bax蛋白表达,激活Caspase级联反应,上调效应子Caspase-3蛋白表达,从而促进细胞凋亡,且炮制品蛋白效果优于生品蛋白.